根據細菌對氧與二氧化碳需要的情況,有以下幾種不同的培養(yǎng)方法:需氧培養(yǎng)法、厭氧培養(yǎng)法、微需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法。
厭氧培養(yǎng)法 厭氧菌的培養(yǎng),必須在無氧的環(huán)境中進行。對用于陰道、創(chuàng)傷、潰瘍的中藥制劑作破傷風梭菌檢驗,須用厭氧培養(yǎng)。產氣莢膜梭菌也是厭氧菌,在無氧的環(huán)境中培養(yǎng),生長良好。最佳的厭氧培養(yǎng)設備,是厭氧培養(yǎng)箱。
(1)厭氧培養(yǎng)箱法∶此即厭氧手套箱法。該箱箱體內有操作室和培養(yǎng)箱,箱架內有二個壓縮氣體的鋼瓶,一個是 N2,另一個是80%N2、10%H2、10%CO2的混合氣體,供向箱內輸入。箱內的O2被充入的N2換掉,剩余的O2在鈀粒催化下與輸進的H2化合成水,保持箱內為無氧狀態(tài)。使用時,通過一雙乳膠手套將手伸進密閉的操作室內操作自如。制作厭氧培養(yǎng)基、接種樣品和轉種培養(yǎng)物、培養(yǎng)和鑒定厭氧菌的所有技術操作,均在箱內進行。
(2)抽氣換氣法∶用帶活塞的玻璃真空干燥缸進行。啟動真空泵,將缸中空氣抽去90%,隨即充入N2,如此反復進行2次,第3次抽氣后,充入80%N2、10%H2、10%CO2。當亞甲藍指示劑無色時,即可置37℃培養(yǎng)。
(3)厭氧缸法:此法是用化學試劑的反應取代抽氣換氣的復雜過程,在缸內形成無氧狀態(tài)的方法。用頂端無外通閥門的玻璃干燥缸,按缸內容積每立升,置入硼氫化鈉0.22g、檸檬酸0.33g、碳酸氯鈉0.37g,供產生 CO2和H2。通過系列操作使成為厭氧缸。置37℃培養(yǎng)。
(4)厭氧菌培養(yǎng)罐法∶厭氧菌培養(yǎng)罐的結構和性能良好,適用,易于操作,效果可靠,故被廣泛應用。普遍使用的是裝12個平板的小型厭氧菌培養(yǎng)罐。
(5)厭氧菌簡易培養(yǎng)袋法∶厭氧菌簡易培養(yǎng)袋是一種14cm×32cm的塑料袋,透明不透氣的無毒復合型塑料薄膜制成。袋內裝有作用不同的三個小管。分別是氣體發(fā)生管、鈀粒催化劑管、亞甲藍指示劑管。當指示劑與袋內氣體接觸,仍保持無色而不變藍,表示袋內為無氧狀態(tài),即可置 37℃培養(yǎng)。
專性厭氧菌的生長繁殖,除采用上述某種厭氧培養(yǎng)法為其創(chuàng)造無氧環(huán)境外,尚應充分重視選用適宜的厭氧菌培養(yǎng)基。