微生物實驗技術(shù)之細菌的接種、分離、培養(yǎng)（六）
發(fā)布時間:2021-12-13瀏覽：1337
分離技術(shù)-劃線分離法
劃線分離法 此法簡便省時，應(yīng)用廣泛。操作時用接種環(huán)挑取培養(yǎng)物。例如挑取樣品的增菌培養(yǎng)液一環(huán)，在平板培養(yǎng)基表面劃線接種。在有強選擇性的SS、HE瓊脂乎板上劃線，又宜隨增菌培養(yǎng)液中混濁生長的濃度不同，取2~3環(huán)接種。一手持平板并撐開，使蓋與平板約呈45°角朝向右方，一手持接種環(huán)伸進到平板表面，進行劃線分離，動作要輕盈自如，線條要均勻相間，充分占用整個平板的表面。
（1）分段劃線分離法：菌苔或濃的菌液多用此法進行分離。從平板表面涂抹培養(yǎng)物的地方開始劃線，每劃連續(xù)的一組線段后，接種環(huán)經(jīng)燒灼滅菌并冷卻，再與上段劃線相交數(shù)次劃出下一組的連續(xù)線段，如此劃到第4或第5段，合蓋即成。
（2）連續(xù)劃線分離法∶含菌量較少的菌液多用此法進行分離。從平板表面涂抹培養(yǎng)物的地方開始劃線，連續(xù)向整個表面左右展開并一直劃完，形成一條接種曲線。
在劃線分離中，沿接種線上各點分散種有菌細胞，先劃的線段因菌多而生長密集，常呈菌苔，隨著接種線推后，菌量就逐漸減少，出現(xiàn)越來越多的單個菌落。非接種線的部位應(yīng)無菌落出現(xiàn)。如果沒有或很少有單個菌落，只見長成串珠狀，甚至成片狀的菌苔，是分離失敗。
作劃線分離的各種平板培養(yǎng)基，均應(yīng)保持適宜的濕度，在表面不能有凝集水，以免細菌在接種線蔓延生長，菌落相互依連。故對新制備的平板，常在臨用前置37℃溫箱內(nèi)蒸發(fā)，除去凝集水后，即可應(yīng)用。